2008年8月.日本家禽学会秋季大会.「鶏の卵殻からのＰＣＲ増幅可能なＤＮＡ抽出手法の開発」

目的

我々は２００７年度春季大会において比内地鶏のＤＮＡ識別手法の開発について報告した。この技術の開発によって、比内地鶏肉と他の鶏肉をＤＮＡで識別することが可能となった。しかし、鶏卵からのＤＮＡ抽出が困難であるため、比内地鶏卵のＤＮＡ識別は困難であった。そこで、本研究では卵殻からのＤＮＡ抽出手法を開発したので報告する。

方法

比内鶏、ロードアイランドレッド種および比内地鶏の卵合計２４検体を調査に用いた。卵殻表面を洗浄し、卵殻膜を除去後、卵殻を粉砕した。粉砕した卵殻４０ｍｇを０．５モルのエチレンジアミン四酢酸二水素ナトリウム（ＥＤＴＡ－２Ｎａ）溶液を用いて完全に脱灰した。その後、常法にしたがって、フェノール－クロロホルム抽出およびエタノール沈殿を行い、ＤＮＡを回収した。卵殻から抽出したゲノムＤＮＡを鋳型として、比内地鶏のＤＮＡ識別に用いたＺ染色体上の１０個のマイクロサテライトマーカーについてＰＣＲ増幅を行った。増幅産物を、ＤＮＡ自動シーケンサーを用いてキャピラリー電気泳動を行い、各個体各マーカーの遺伝子型を判定した。

結果

殻１ｍｇ当たりのサンプル回収量は12.5-42.2ngであった。1サンプル当たりの平均ＤＮＡ回収量は813ngであり、従来法(Strausberger & Ashley 2001)よりも５０倍効率的にＤＮＡが回収できた。卵殻から得られた全てのＤＮＡサンプルは、１０個のマイクロサテライトマーカーのＰＣＲ増幅が可能であった。同マーカーにおける比内地鶏の卵の遺伝子型は、比内鶏と合致し、ロードアイランドレッドの卵は、比内鶏および比内地鶏の卵と簡単に識別することができた。以上の結果から、卵殻からの簡単かつ効率的なＤＮＡ抽出手法が確立したことにより、比内地鶏卵のＤＮＡ識別が可能になった。